感受态细胞有何特点?如何保证它的质量?(感受态细胞)
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1、感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
2、 、 CaCl2法: 操作: 1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成复合物。
3、 2.此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),外源DNA就可能被细胞吸收。
4、进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
5、 3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。
6、 意义: 将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作。
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